DNA合成儀合成產(chǎn)物的PAGE純化技術(shù)
如何進(jìn)行DNA合成儀合成產(chǎn)物的純化？目前公認(rèn)和大多采用的DNA粗產(chǎn)物后處理方式有4種：C18柱脫鹽，OPC柱純化，HPLC純化和PAGE純化。下面PAGE純化的方法。 PAGE純化是幾乎所有專(zhuān)業(yè)書(shū)籍上介紹的*佳純化方法。它是依據(jù)DNA片段在變性聚丙烯酰胺凝膠中電泳時(shí)的遷移率不同來(lái)分離大小片段的。由于各分子所帶電荷和大小不同，綜合影響其在凝膠中的遷移速度，大片段遷移得慢，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的電泳，大小片段會(huì)分開(kāi)，然后停止電泳，剝離凝膠，置于熒光TLC板上在紫外燈下切割目的條帶，浸泡碎膠，并從泡膠的鹽溶液中回收目的DNA。
優(yōu)點(diǎn)是純化效果很好、尤其是純化長(zhǎng)鏈效果更好、而且是可以直觀看見(jiàn)DNA片段合成情況的質(zhì)控環(huán)節(jié)。通常認(rèn)為的缺點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)室水平的PAGE純化實(shí)驗(yàn)步驟多費(fèi)人工、電泳及后處理過(guò)程樣品損失量大、電泳裝置局限或電泳時(shí)間如果不夠會(huì)影響純化效果。但這些缺點(diǎn)完全可以克服。我們通過(guò)擴(kuò)大規(guī)模流水作業(yè)使實(shí)驗(yàn)過(guò)程便于掌握和節(jié)省人力；在粗樣品中加入尿素飽和液增加樣品比重減少電泳上樣的損失；改用C18柱回收產(chǎn)物，使得回收效率大大提高；通過(guò)特制電泳裝置，增加凝膠厚度和長(zhǎng)度來(lái)增加負(fù)載量和分離效果等等。
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