溫度控制 對普通PCR儀來說,溫度控制指標主要是指溫度的準確性、均勻性、以及升降溫速度,對梯度PCR儀來說,除了溫度的準確性和均勻性、升降溫速度以外,還必須考慮儀器在梯度模式和標準模式下是否具有同樣的溫度特性。
溫度的準確性是指樣品孔溫度與設定溫度的一致性,它直接關系到實驗的成敗。如果排除樣品加入過程中的問題,對于PCR反應而言*重要的莫過于溫度控制的準確性,由于PCR是一個幾何級數擴增的過程,擴增過程中退火溫度的細微變化會被放大而直接影響結果,不論是變性、退火還是延伸都需要準確控制溫度,對退火溫度而言溫控顯的尤為重要,有時1度甚至0.5度的差異也能決定實驗的成功與失敗,所謂差之毫厘,謬之千里。因而對PCR擴增儀而言溫度控制就意味著質量。
溫度的均勻性是指樣品孔間的溫度差異,它關系到在不同樣品孔進行反應結果的一致性。我們在實驗中發現有時用同樣的樣品,同樣的PCR反應程序,*后的結果竟然差異非常明顯,或許就是因為不同位置的溫度不均一性所致。一些使用過早期PCR儀的腦子格外靈光的研究人員偏愛使用PCR儀中間某幾個固定的孔,就是因為過往反復的教訓和認真的思索得出了這樣的結論,PCR儀的溫度均勻性不好,特別是*外周的樣品孔情況更差,很有可能影響實驗結果——即“位置的邊緣效應”會影響結果的可重復性。正是這種位置效應對定量PCR的結果的影響更為明顯,所以后來才有Roche和Cobbett的離心式定量PCR的重大**。
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